1、您在课件中说真菌生化反应要放48h，但我们在工作中发现，酵母样真菌板条药敏30℃孵育24h和48h读板药敏结果会有差异，孵育48h容易出现部分念珠菌（如白念、热带）对三唑类（如氟康唑、伏立康唑、伊曲康唑）出现拖尾现象而出现耐药率偏高，您们酵母样真菌药敏孵育多长时间报告结果？您是怎样平衡鉴定和药敏的准确性的？
答：念珠菌鉴定与药敏在一起的复合板建议放28℃48小时，此时鉴定部分生长良好而且三唑类药敏拖尾是最小的。不要放30℃或者35℃，因为＜37℃时，念珠菌三唑类药敏的拖尾与温度是正相关的。
2、您在课件中提到痰培养阴性报告“未分离出致病菌”，而国内临检操作规程和美国临床微生物操作手册都是报告“正常菌群生长”。这样报告（未分离出致病菌）是否合适？毕竟我们现在细菌室的常规培养并没有覆盖所有可能病原菌。
答：报告正常菌群和未分离出致病菌都是一个意思，但国内临床医生水平太差，他们是一见到细菌就怕，而且他们会问，你们怎么知道就是正常菌群，也就意味着你们将花大量的时间去给他们解释微生态学的东西。而且报告“未分离出致病菌”也包含了抗生素应用后导致的分离不到，目前技术水平和条件限制导致的分离不到，以及某些试验误差（例如培养基失控、培养条件选择不当、人员技术水平不足导致的不认识）导致的分离不到。报告“未分离出致病菌”不等于报告“没有致病菌”。
3、GI指数是什么？怎么做？
答：GI指数，growthindex生长指数的意思，用于表征培养基的促生长效果的客观指标。是表示单位接种量，单位时间内，培养基能长出的细菌的数量的负对数和菌落直径的乘积。GI指数越大，则说明培养基促生长效果越好。具体的操作方法见《微生物检验问与答》第二版第十章相关章节。
4、请问卢老师，标准菌株和因子纸片都没有注册证啊，怎么办？
答：标准菌株是从卫生部临床检验中心购入的，用于质量控制的，卫生部临床检验中心不属于企业，菌株也不属于试剂，无需注册证。因子纸片我们是从OXOID买的，具体是否有证不清楚，不过我们从来没有人来检查过这些哈。
5、粘液型铜绿必须48h吗？工作中也见过24小时就生长很好的粘铜呀？
答：粘液性铜绿必须48小时，24小时生长良好是在没有抗生素的情况下，药敏试验时就不是这样了。文献报道，以及我们的统计结果显示，大多数粘液性铜绿48小时药敏与24小时差异显著，24小时特别容易出现假敏感，这在药敏试验中是必须杜绝的“主要误差”。
6、希望卢老师能对痰培养的阴性报告再谈谈报告要点，谢谢!
答：对于阴性报告，课中已经讲得很多了，还是再回顾课件吧！
7、怀疑肺炎链球菌时，有的在一区原始标本区，贴奥普托辛纸片，来初次鉴别是否是肺链，这样的方法可取吗？
答：医院是这么做的，对于肺链数量很多的情况下还是可取的，与质谱联合可以缩短鉴定时间。但对于涂片时肺链菌量不大或者涂片多，实际长起来的少的标本，这种做法不可取，因为细菌很可能只在原始区少量的出现，OP一贴，可能就被完全抑制了，会出现人为的假阴性。
8、卢老师，痰标本直接接种CHROMager的目的是什么？您似乎提到了丝状真菌？另外，群里许多老师说粘液铜绿药敏48小时报告，有标准吗？
答：直接接种CHROMager的目的我的课中我已经讲得很清楚了，再回顾一下吧！粘液粘液性铜绿在前面，以及在以往的帖子中讲得很多，翻看以前的帖子吧！有专门的几个主题讲这个。
9、二氧化碳环境会影响奥普托辛的抑菌环么？
答：对于二氧化碳对OP试验的影响，在陈东科老师的文章中或者《实用微生物检验与图谱》中都有详细叙述，去看看吧！
10、请问卢老师你们科微生物有发报告权的工作人员都是检验医生吗？
答：我们正在往那个方向努力，目前还没有取得执业医师执照的同事。但我们授权的具有报告权限的同事都是经过考核，经验丰富，具有相当临床知识的技师。在独立报告前，都会在上级老师的带教下，经过一段时间的强化训练，放手不放眼，在监督下完成报告。等其熟练后才放开权限。
11、24小时可以直接发报告吗？
答：24小时发报告的只是其中一部分，例如中性粒细胞很少的非感染性炎症、灰区标本、中性粒细胞多但抗生素治疗后全片阅片已经见不到细菌的标本、抗酸杆菌涂片阳性的标本、六胺银染色查见肺孢子虫的标本、以及其他延长培养也无法获得阳性结果的标本。
12、粘液型铜绿不溶于盐水做药敏前如何处理?
答：这叫不易乳化！粘液性铜绿取巧克力培养基上的细菌就非常容易乳化，试试吧！
13、卢老师你好！我想问问关于涂片染色报告：是报告在给原始标本涂片染色镜检时在镜下看到的所有细菌？还是像卢老师说的涂片报告只报告镜下看到吞噬或者白细胞相关性致病菌的染色结果？
答：什么要报告所有细菌，难道正常菌群和定植菌也有意义？你能确定连你这种专业微生物检验人员都弄不懂的问题，临床医生他们会懂？
14、中国蓝麦康凯不能放CO2吗？
答：中国蓝、麦康凯都不能放CO2环境，因为CO2会溶到培养基中，导致培养基pH下降，影响培养基显色，可能会导致部分氧化能力较强的细菌看起来像发酵菌，例如鲍曼看起来像肺克或者阴沟，导致错误判断。
15、不合格的痰标本还有必要等24小时吗？不是阅片之后就打回去重留吗？
答：这个需要和你们临床达成一致。看他们接受哪一种做法。我们08年前是全部打回去重留。现在是出一份标明标本不合格的阴性报告。
16、请问灌洗液培养有正常咽喉菌生长怎样报告合适？
答：灌洗液要区分保护套下与非保护套下采集两种情况，前者需要做菌落计数，咽部菌群数量较少时是可以接受的，根据涂片结果选择非咽部菌群鉴定药敏；而后者基本等同于痰标本，如果仅仅咽部正常菌群生长，直接报告阴性即可。
17、卢老师，请问实验室用的商业化平板，如果制造商可以提供相关的质量控制记录文件符合CLSIM22-A3的标准要求，实验室是否还需要进行培养平皿质量的检验？
答：商品化成平培养基质量参差不齐，良莠夹杂，很多商家为了降低成本，低价竞争，不惜偷工减料牺牲质量，或者使用低劣的原料。而出厂质检大多都是流于形式，并没有真正的实实在在的做。如果真正按照CLSIM22-A3的标准要求，国内至少2/3的成品培养基过不了关。由于首代分离培养基牵涉到细菌分离的阳性率，属于微生物检验的门户，必须严加控制，因此实验室对于培养基的控制是必须的。而且，在培养基购入后，医院的实际存储条件的不同，真正的保质期与说明书上的并不一致，也就意味着厂医院可能就达不到。那么为了防止已经失效的培养基被错误的使用，我们的质量控制还需要再次加强，这些都是无法要求厂家做的事情。
18、请问痰标本要在多长时间内接种？
答：根据我们的观察，当温度超过30℃时，痰标本中的肺链会很快自溶，大概能稳定的时间只有2小时。而在25℃以下时，肺链在痰液中可以稳定6小时以上。其他细菌都没有肺链的情况糟糕，因此微生物室应该制订规则，对于夏季的痰标本无法及时送检时必须要求冷藏，或者2小时内送检。
19、不合格的标本还需要接种吗？
答：上一次讲课你应该没有认真听讲，我说得很清楚了，不合格标本无需接种。
20、痰涂片结果需要报告上皮细胞吧？
答：不合格标本需要注明上皮细胞数量，否则怎么证明标本不合格？
21、在上期的讲课中，详细讲了小儿痰标本（咽拭子）的流留取方法，请问卢老师：小儿咽拭子合格的标准是什么？
答：美国《临床微生物手册》与《全国临床检验操作规程》好像都没有专门把小儿标准的单独列出来吧？
22、卢老师，MH放普通温箱，但卡他的药敏是否要放二氧化箱呢？
答：卡他不属于苛养菌，生长不需要CO2，放普通培养箱即可。
23、看到卢老师课件里说流感嗜血杆菌在草链周围也有“卫星现象”吗？
答：对的。当标本中的流感杆菌数量很多时，在次日的血平板上草绿色链球菌菌落的周围就有“直接卫星现象”。
24、黄杆菌生长不需要二氧化碳，仅在血平皿上生长，若把接种黄杆菌的血平板放二氧化碳环境下会长吗？或者说痰液中有黄杆菌放在二氧化碳环境中会长吗？
答：黄杆菌是一种对万古霉素敏感的非发酵菌，不需要CO2。但不是说有CO2会抑制它的生长呀！需要CO2细菌一定要有CO2才能生长，但不需要CO2的细菌有没有CO2都会长。
25、国外有教科书说假肺炎链球菌在CO2含量低的情况下同样对奥普托欣敏感，会产生肺炎链球菌鉴定的假阳性，不知卢老师是否遇到这种情况？
答：你的问题在《实用微生物检验与图谱》中有详细介绍，还是去看书吧！
26、老师，痰被洗涤消化后再接种会不会影响致病菌的生长不良呢？
答：你的问题早在数十年前就有人研究过了，书上文献中比比皆是，自己翻书看看。
27、多次痰涂片，见鹿角样菌丝，如何判断是定植感染？
答：痰液中查见的真菌菌丝极少有来自上呼吸道的定植。不过临床所认为的气道定植（变应性支气管肺曲霉菌病）倒还是有的，通常大量曲霉菌菌丝，细胞很少无明显包裹现象的多数是气道定植（变应性支气管肺曲霉菌病），而菌丝较少明显包裹的则多数是侵袭性肺曲霉菌病。
28、请问卢老师；所有分离出的首代细菌均需分纯吗？如麦康凯上长的非常纯的G-杆菌也分纯吗？
答：对于分离状态比较好的大菌落细菌，如果用于鉴定药敏的菌落数量足够，可以不需要经过分纯这一步。但前提是大菌落下面不能覆盖小菌落，仔细观察后做决定吧！
29、痰标本的酵母样真菌分离都是没意义的，还是只针对白念？
答：痰培养中的念珠菌基本都是没有意义的，文献报道念珠菌培养阳性与组织病理学之间的符合率只有0.2%，但不是指所有酵母样真菌，例如隐球菌在痰培养中意义就较大。
30、想请教老师，如何提高痰涂片染色质量？
答：痰涂片染色质量受几方面因素影响：1、制片的厚薄是否均匀；2、不同厂家染液性能的摸索；3、人员技术娴熟程度。此三者缺一不可。首先，制片推荐压片法薄而均匀；其次，染液购入前必须使用痰涂片反复摸索各步骤染色时间至最佳状态，要求中性粒细胞细胞核着色深，胞浆着色浅，胞浆胞核对比度强烈，背景颜色浅，无染料沉渣；最后，必须对组上的每个人进行强化训练，直至其能染出最佳效果。
31、对于肿瘤科和ICU病人，痰中有大量酵母样真菌，也没有意义吗？
答：得出结论认为念珠菌无意义的文献就是从癌症、ICU、血液病等高危人群中研究得出的，你还认为它们有意义吗？
32、请问卢老师，卡肺染色阳性率低，请问PCR检测谁家有证？
答：六胺银染色采用的标本应为灌洗液，痰液阳性率确实不高。PCR我们没有做过，不了解。
33、请问老师，针对粘液型细菌在用药方面有什么特殊的要求吗？
答：粘液性细菌这个概念实在太广泛了。而对治疗有影响的粘液型细菌目前研究得比较清楚的只有粘液性铜绿，其他细菌好像并没有特别的不同。对粘液性铜绿的治疗，目前普遍共识是采用阿奇霉素联合喹诺酮类等敏感抗生素联合治疗，或者采用妥布霉素雾化吸入局部治疗。其他的方法还有联用藻酸盐抗体、联合氨溴索等等。
34、对于不合格的痰涂片，不少的片子能看到很多的孢子和菌丝，需报告给临床吗？还是不报告，而是与临床沟通建议加强口腔护理？
答：不合格痰标本不用做任何处理。临床怀疑鹅口疮时，自然会送口腔拭子或者假膜组织。因为正常情况下口腔就有大量念珠菌存在，痰标本采集后在室温放置过程中就会自然萌发出菌丝，因此见到孢子菌丝不代表一定有感染。
35、卢老师如果是阴性杆菌，MAC和BA上都有单个菌落，你会挑选MAC上的还是BA上的菌落做鉴定药敏？
答：通常选用麦康凯，因为麦康凯上能生长的细菌种类更少，菌落下覆盖小菌落可能性更小，污染的可能性更小。
36、请问卢老师粘液性细菌药敏报告的文字建议模式？
答：是粘液性铜绿！具体见课件。
37、卢老师您好！1.看您的报告单药敏是K-B法的，您说的非发酵菌要48h判读结果，商品化的药敏卡也是48h吗？例如V2C的GN04。2.如果有丝状真菌生长的话，你们是直接报告还是让病人重新送检排除污染。
答：我们用的是手工鉴定哈!使用微量管或者国产鉴定板的都是需要48小时才可靠。V2C原理和手工方法不同，他们有自己的判断时间。丝状真菌生长就联想到污染？你的观念落后了吧？对于曲霉菌阳性的痰标本结果既要报告，也要建议临床重复送检。
38、请问卢老师，阳性报告中的临床评注是不是应该有可以借鉴的资料？一直很想增加，可是又怕描述不对，画蛇添足，起反作用。
答：没有特定的资料说应该如何评论。不过可借鉴的资料也还是比较丰富的，例如：热病43、44版、美国临床微生物手册、IDSA各种指南、CLSI文件等等。
39、大环内酯类类口服需多长时间呢？
答：针对铜绿吗？文献上是用低剂量0.25qd维持，每三天一个循环，口服三天停三天再接着口服。需要坚持半年以上。
40、老师您好，我有几个问题：1、曾经看到一篇文献说，做纸片法药敏试验，挑取菌落时，只挑取一个单独菌落和挑取多个单独菌落配置菌悬液，药敏结果是不一样的，原因是耐药基因在质粒上携带，质粒具有可转移性，因此多挑取几个菌落配置菌悬液，做的药敏试验结果才是准确的。不知这个说法对不对？应该提倡这种做法吗？
答：这句话是有文献支持的。但前提一定是纯菌。首代分离时不允许这样做，因为不同菌落可能是不同的细菌，或者同种不同株。
41、粘液铜绿用V2C做鉴定，除了使用培养48小时后的菌落，还有什么注意事项？菌落很黏，不易配置成均匀菌悬液。
答：谁说过要用48小时后的菌落做药敏？都老龄菌了生化反应都不典型了还能用来上V2C？我说的48小时指的是铜绿扩散法药敏要连续培养48小时再判断结果。对于该菌菌悬液的配制方法在上面的问题中有回答。
42、我们最近碰到有一个ICU病人，每隔几天都做痰培养，吸出痰，黄浓痰，镜检合格，连续5，6次培养结果都是臭鼻克雷伯菌，几乎所有的药都耐药，药敏卡提示的是产ESBLs，以及产碳青霉希酶，请问这是否可以认为是病原菌？应该怎样用药？
答：痰培养中病原菌的判断依靠的是痰涂片，而不是连续培养出什么菌。草绿色链球菌每次培养都有，你能说它是真正的感染菌？对于用药的问题还是建立在找到真正感染菌的基础上才行。另外，臭鼻克雷伯菌耐药性并不高，是不是鉴定错误，细菌如果是肺克就很容易解释。例如产KPC酶肺克耐药性就很高，治疗通常只有阿米卡星或者替加环素有用。
43、痰涂片，医生要找细菌，如果看到正常菌群，那要怎样发报告？医院怎样出这类报告？
答：我在课件中反复强调，菌群不要报，因为这样做会误导医生。课件中有明确的说明，痰涂片到底应该怎么报告。还是回顾课件吧！
44、卢老师：粘液型铜绿大环内酯类(阿奇)联合妥布、丁胺卡那，分开给药，如何分开？是同一天吗，还是提前？
答：很简单。阿奇霉素口服后的峰浓度大概在口服药物后2.5小时到达，也就是说联合用药的药物的给药时间应该至少在3小时以后。我们推荐间隔时间6小时为最佳，此时血液中的药物大多数已经分布到组织间隙中去了，此时静脉给药或者局部雾化吸入均可。
45、卢老师，直接涂片法有什么意义？跟染色法各有什么优缺点？
答：直接涂片与涂片染色都是痰培养中的一个试验步骤，不是独立的检验方法，不能比价二者的优缺点。就好比评价人的优缺点不能将人这个整体分割开来去评价人的手脚和脑袋的优缺点一样。
46、请问老师，如果血平板上，只有比较纯且单一的细菌（如溶血葡萄球菌）需不需要处理，如果不处理，是否需要在报告中提示临床？
答：CNS在痰培养中没有意义。不能根据细菌的数量与纯度来判断是否需要处理。就好比草绿色链球菌，在痰培养中再纯也没有人会认为它们有意义一样。细菌的纯度只是推测细菌为感染菌的一个间接表现，通常导致感染的细菌基本都是单一的，但单一的细菌并不一定都是感染菌，而多种混合细菌也不一定就不是感染菌，例如吸入性肺炎中的厌氧菌很多都是混合菌群。
47、痰同时培养出真菌和其他常见致病菌时，如果痰涂片都没有看到吞噬或者只看其中一种菌吞噬到该怎么报告呢？只报告吞噬的细菌吗？需要提示有真菌生长吗？
答：“培养出真菌和其他常见致病菌”？应该是分离菌吧？培养出来就知道是致病菌了还用费劲的分析吗？痰涂片观察吞噬现象是一个需要经验的技术活，影响因素有点多，需要制片、染片处于最佳状态下，而且阅片人员必须具备良好的形态学积累，否则漏诊较严重。如果你们有经验，那么建议只处理吞噬的细菌，其他一概不管。如果你们没有经验，建议你们从现在开始尝试着正规的涂片、阅片、结合涂片与培养分析。如果你们不想改进，打算维持现状，那我奉劝你们痰培养还是不要做了，停了吧！传统意义上的痰培养不到5%的临床符合率，你们费劲倒腾出来的结果临床医生是不会看的。即使碰到个没有经验的医生采用了你们的报告，你们的报告对他们的误导将大于对他们的促进。
48、卢老师，您好！昨天ICU病人，脓血痰，洗痰后涂片发现真菌孢子和菌丝，但没发现胞内吞噬（可能是技术因素），今天看平板，发现是鲍曼不动杆菌，像这样的病人怎么判断是致病还是定值？
答：根据你的描述你似乎毫无涂片经验，涂片都只去看大目标去了。涂片染色后不仅仅要看大目标的包裹现象，还要看小目标的吞噬。鲍曼感染与否关键是看其是否导致了炎症，是否激发了免疫反应，有没有被吞噬。观察胞浆中有无G-成双排列的球杆菌或者粗大的两端钝圆的G-杆菌。这些才是有价值的信息。而你在涂片中见到的念珠菌在培养基上肯定也有生长的，只是你没有仔细观察，不过这些真菌都没有意义。
49、卢老师，请问痰直接涂片如何保证生物安全？
答：在安全柜内操作就不会有问题。否则除非你不做事，任何操作都有一定的安全风险。
50、有的病人连续送标本，标本涂片也都合格，可是有时候几次长的细菌都不一样，该怎么解释？
答：微生物检验人员最难的就是用发展的、动态的观念来分析问题。对于你说的问题，你就没有想过在连续送检标本的这段时间内，病人都在用抗生素？而且可能是换用了不同的抗生素，抗生素对培养结果的影响很大，不同抗生素、同一种抗生素使用的不同阶段呈现出来的表现都是不同的，因此同一个病人不同时间段的痰培养变化是肯定的。因此，这对于采用优势菌理论为基本判断方法的微生物技术人员来说这就是个天大的难易逾越的障碍。要是换种思维，从免疫学的角度，采用吞噬原理来判断，不要去管细菌数量的多少，而是看哪种细菌被吞噬，这样，只要连续几天涂片中观察到的吞噬菌是一样的，培养结果就肯定是一样的。因为第二天无论其他细菌生长成什么样子，只要目标细菌还在，分离鉴定方向就还是依旧，那么报告结果就不会变。
51、痰涂片未见＞25WBC，连续几次长的很多很纯的细菌，怎么办！也是定植吗？
答：痰涂片白细胞少，就意味着标本不合格。分离到的细菌为口腔定植菌的可能性就更大，此时纯又能怎么样？有谁告诉你纯的细菌就是感染菌了？下呼吸道感染菌大多比较纯这个命题是成立的，但反过来命题是不成立的呀！
52、我想请问一下各位老师，微生物的涂片报告不可以有一个标准吗？
答：涂片这个事情在国内还是个近几年来才开始强调的，医院都不做涂片，没有经验，也没有谁去主导搞一个什么标准。目前很多规范指南的都是参考国外的东西。不同国家，不同时期发表的不同文献有不同的做法，用五花八门来形容也不为过。不过，大凡干微生物检验一定年限的老资历微生物检验人员都有一定的评价能力，好不好，是否科学，只要一比对就有结论。我们的涂片报告方式经过众多同行专家的评价，被认为是目前最为完善的报告方式，可以不妨参考一下。
53、卢老师：报告格式涂片和培养结果要等一起报吗？是不是涂片结果要先发回报告？
答：痰涂片可以单独医嘱，而培养必须包含涂片。当临床只开了涂片的，应该当天就报告。而只开培养的，涂片与培养结果整合在一起报告。
54、卢老师：脓痰标本：涂片脓细胞+++，未见细菌（或许菌量太少，没有看见），培养出大量肺炎克雷伯菌（纯培养），请问肺炎克雷伯菌是致病菌还是定值菌？
答：你说的情况，有可能是肺克受药物影响形成了球形体（细菌L型），你们不认得了，但培养仍然还是能生长出来。此时，如果观察到白细胞内的球形体，则你们需要将肺克当成感染菌处理。还有一种情况就是真正的感染菌另有其“菌”，抗生素抑制了真正的感染菌，留下了肺克，例如流感感染，肺克定植，使用阿奇霉素治疗，流感消失，肺克留下来，此时的肺克就没有意义——因此，关键还是要看见典型的吞噬才行，无论是变形了的还是正常形态的都行。
55、卢老师，非结核种之间的镜下形态有区别吗？可否在镜下大概的区分？有规可循？
答：结核分枝杆菌大多比较细，丝状，分枝明显。非结核分枝杆菌中的快速生长分支杆菌一般都比较粗，分枝不太明显。其他的分枝杆菌遇到的比较少，没有直观印象。
预览时标签不可点